流式细胞仪的原理是什么?
最近一直在了解流式细胞术和流式分选的知识,看到这个问题想回答一下:
流式细胞仪是以流式细胞术为基础,快速精确的对单个细胞的理化性质进行定量分析和分选。分析流程为:制备单细胞悬液,用特异性荧光染料标记的抗体进行染色,经染色后的待测细胞在一定气体压力下被压入流动室,在鞘液的包裹下细胞呈单行排列,依次通过检测区域,在激光束的照射下细胞会产生散射光和激发荧光。这两种信号会同时被光电倍增管( PMT) 接收。接收后可转换为电信号,通过模/数转换器,将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号,进行分析。
如上所述,流式细胞仪是由液流系统、光路系统以及检测分析系统三部分组成,部分仪器还具有分选功能,能对粒子进行充电和偏转从而实现细胞分选。
液流系统:通过产生压力使含有目的细胞的样本快速进入仪器,在封闭的样品管中利用样品和鞘液之间的压力差是样本聚集到光学分析系统;
光路系统:由不同的激光器发射出的激光照射到细胞表面产生光信号,而后经过不同的光路系统被接收。在流式照射室的分析点,激光照射到细胞表面发生散射和折射,并发射出散射光包括前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC),同时细胞表面的荧光素被激发发射出荧光。前向散射光和侧向散射光检测器收集散射光转变为电信号;荧光则被聚光器收集,不同颜色的荧光被双色反光镜转向不同的光电倍增检测器,将荧光信号也转变成电信号。FSC和SSC是流式分析中两个非常基本的参数。FSC的值能代表细胞的大小,细胞的体积越大则FSC就越大。SSC则代表细胞的颗粒度,细胞内细胞器和颗粒度越大则SSC越大。
检测分析系统:荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原强度或细胞内物质的浓度,光信号转换为可被计算机识别的电信号。计算机把所测量的各种信号进行处理分析。
流式细胞分选是在流式细胞术的基础上进行的。在流动室的喷口上方配有一个超高频的压电晶体,产生的振动使喷出的液流形成均匀的液滴,待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷(对标有荧光素的细胞液滴带以负电荷;未标记荧光素的细胞液滴带以正电荷;而不含有细胞的液滴则不被带电荷),当液滴流经偏转板时,在高压电场的作用下偏转,落入各自的收集容器中,不带电荷的液滴落入废液容器,从而实现细胞的分离。
第一次回答希望能帮到你,如有理解不当的地方,欢迎指正!
流式细胞仪十大品牌排名?
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流式细胞仪名词解释?
流式细胞仪(Flow cytometer )是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。
多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器,它只能测量一个细胞的诸如总核酸量,总蛋白量等指标,而不能鉴别和测出某一特定部位的核酸或蛋白的多少。也就是说,它的细节 分辨率为零。
流式细胞仪FACSVerse可以检测什么抗体?
流式细胞仪FACSVerse可以检测(单克隆抗体)。仪器适用范围:流式细胞仪结合定量荧光细胞化学方法,单克隆抗体和免疫荧光染色原理和技术,对快速流动液体中的单细胞的多种参数进行细胞定性和定量分析以及细胞分选纯化。应用于细胞周期和DNA倍体分析、凋亡检测、细胞免疫表型分析、细胞因子的测定等方面。
流式细胞仪检测有个设门法.怎样设门?
所谓的门,在流式细胞仪检测的时候术语叫做gate。流式细胞仪是针对细胞(后者颗粒)的群来做研究的。往往是先选中感兴趣的一个细胞群,再分析下一步的染色,可以进行很多分级。
比如先从所有细胞中画出淋巴细胞,可以在FSC-SSC散点图上画出淋巴细胞的群,比如一个方框,或者任意曲线的gate,也就是所谓的门。把淋巴细胞括在内。然后在另外一个散点图上只显示这个gate里的细胞,但是把横坐标和纵坐标改为其他荧光标记。总之,门就是一个选择细胞群的手段。
流式细胞仪的基本工作原理是什么?
我简单说一下:
1. 首先,机器吸取细胞混悬液,射入由鞘液(一般都是磷酸盐缓冲液)。由于鞘液的流速大,所以细胞混悬液通过轴流的形式在中央,一般是单个细胞排队的形式。
2. 然后细胞通过检测窗口。有激光束照射。一般细胞都经过荧光染色,被激光照射后,会有不同波长的激发光产生。机器设有检测器来探测激发光的强弱3. 根据激发光的强弱,来判断细胞和染色物质的结合情况,从而得到要检测的结果(比如抗原量,DNA量,等等)