散文精选网第二代测序技术？
第二代DNA测序技术又称下一代测序技术，是对第一代测序技术的划时代变革的核心。
现有的技术平台主要包括Roche/454 GS FLX、Illumina/Sol-exa GenomeAnalyzer、Helicos BioSciences公司的HeliScope? Single Molecule Sequencer、美国Dana-her Motion公司推出的Polonator；以及连接法测序 (sequencing by ligation)，即通过引物来定位核酸信息，技术平台有Applied Biosystems/SOLiD? system。以上技术平台所运用的测序原理均为循环微阵列法
延伸阅读
二代测序建库流程？
第一部分DNA酶处理：试剂为PROMEGA( RQ1 RNase-Free DNase )
目的：失活DNase酶
RNA（TE洗脱）8微升
RQ1 RNase-Free DNase 10X Reaction Buffer 1微升
RQ1 RNase-Free DNase 1微升/微克RNA
合计10微升
37℃ 30分钟孵育
加1微升的RQ1 DNase 终止液
65℃ 10分钟使DNase酶失活
（PS:经验这一步最好在核酸提取之前就处理好，具体步骤如下：取样本反复冻融三次，然后一万转离心十分钟，取上清，用0.22微米的滤膜过滤，加DNase，提核酸）
第二部分RNA-seq system V2(cat.7102)
目的：生成并纯化cDNA
一、第一链合成
1. 融解第一链cDNA合成试剂（蓝色盖）和无核酸酶的水（绿色）
2. 短时离心A3ver1 放在冰上，votex A1Ver4和A2ver3，离心后放在冰上；无核酸酶水放在室温；
3. 在冰上，取2ul A1和5ul total RNA （500pg到100ng）放在0.2mlPCR管里；
4. 将PCR管放在PCR仪中运行程序1：
RNA量≤ 1ng时，65℃ 2min，4℃存放
RNA量> 1ng时，65℃ 5min，4℃存放；
5. PCR仪降到4℃后取出PCR管放在冰上，加入制备好的第一链合成试剂，每个样本加入3ul，混匀后，离心放在冰上：
第一链合成试剂：2.5ul buffer mixA2+ 0.5ul 酶混合液A3（共3ul）注意：加酶A3时要慢慢加入，反复吹打枪头至少5次确保酶加入进去
6. 把加入第一链合成剂和样本的PCR管放在PCR仪上运行程序2：
4℃ 1min，25℃ 10min，42℃ 10min，70℃ 15min，4℃hold
二代测序 三个分支有哪些？
基于二代测序的技术形成的技术主要还是分三个分支，WES/WGS，RNA-seq，Chip-seq。关于WGS，主要还是来检测DNA序列上的突变、SNP以及拷贝数变化的，这个我们没有做详细的介绍。
剩下的两个Chip-seq主要是用于观察蛋白对于核苷酸的调控关系的，而RNA-seq则是来观察基因的表达的。至于Hi-C，只是因为最近比较火。
三代和二代测序哪个好？
三代测序最好。
三代测序：单分子测序
背景：测序技术经过第一代、第二代的发展，读长从一代测序的近1000bp，降到了二代测序的几百bp，通量和速度大幅提升。第三代测序的发展思路在于保持二代测序的速度和通量优势同时，弥补其读长较短的劣势。三代测序与前两代相比，最大的特点就是单分子测序，测序过程无需进行PCR扩增。
什么叫一代基因和二代基因？
一代基因指的是一代DNA测序技术，第一代测序技术主要基于化学降解法和双脱氧链终止法的原理，配合放射性同位素标记、凝胶电泳和放射自显影测定DNA序列；
二代基因，二代DNA测序技术，也称为高通量测序技术，可以一次针对几十万到几百万条DNA分子进行并行测定，极大地增强了测序的检测通量，降低了测序成本并缩短了检测时间。而且二代测序技术是最不可能由于操作不当、缺失、稀有转录及克隆细菌不稳定的原因而产生错误的。
mds二代测序是干什么的？
MDS 预后评估需要检测多基因突变。为了适应高通量和高敏感性的要求，二代测序(NGS ) 应运而生。NGS 技术是对传统的一代测序技术的一次革命性改变，能够同时并行对几十万或几百万条较短 DNA 分子进行序列分析，NGS 不仅测序速度快，而且检测深度高于一代测序 100 倍以上，还可以相对定量。
目前多中心实验室的评估表明，二代测序具 有高度一致性和可重复性，更重要的是目前 NGS 的检测成本已降低到可以用于常规临床检测。因 此，目前 NGS 在 AML 和 MDS 中的突变监测已成为研究热点。
二代测序的具体流程？
操作流程如下：
1、测序文库的构建 首先准备基因组，然后将DNA随机片段化成几百碱基或更短的小片段，并在两头加上特定的接头。如果是转录组测序，则文库的构建要相对麻烦些，RNA片段化之后需反转成cDNA，然后加上接头，或者先将RNA反转成cDNA，然后再片段化并加上接头。
2、锚定桥接 Solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行，flow cell又被细分成8个Lane，每个Lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的DNA 片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构，以供后续的预扩增使用。
3、预扩增 添加未标记的dNTP 和普通Taq 酶进行固相桥式PCR 扩增，单链桥型待测片段被扩增成为双链桥型片段。通过变性，释放出互补的单链，锚定到附近的固相表面。通过不断循环，将会在Flow cell 的固相表面上获得上百万条成簇分布的双链待测片段。
4、单碱基延伸测序 在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dNTP 、DNA聚合酶以及接头引物进行扩增，在每一个测序簇延伸互补链时，每加入一个被荧光标记的dNTP就能释放出相对应的荧光，测序仪通过捕获荧光信号，并通过计算机软件将光信号转化为测序峰，从而获得待测片段的序列信息。
5、数据分析 这一步严格来讲不能算作测序操作流程的一部分，但是只有通过这一步前面的工作才显得有意义。测序得到的原始数据是长度只有几十个碱基的序列，要通过生物信息学工具将这些短的序列组装成长的Contigs甚至是整个基因组的框架，或者把这些序列比对到已有的基因组或者相近物种基因组序列上，并进一步分析得到有生物学意义的结果。
二代检测是什么？
二代测序又称为新一代测序或称为高通量测序，我们可以同时对多个基因的多个突变位点，进行后续突变衡量，以及后续突变状态的检测，指导后续的靶向治疗。
二代测序又称为新一代测序或称为高通量测序，是通过我们新的技术，同时对十几万条或几十万条基因状态进行同时的评估。
