提取RNA时蛋白酶K是做什么用的?
蛋白酶,顾名思义,降解蛋白的酶,是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键,用于生物样品中蛋白质的一般降解。在RNA提取中,蛋白酶k的作用主要是降解RNA酶,防止RNA的降解。
延伸阅读
用什么溶解蛋白酶k最好?
双蒸水
蛋白酶K是一种从白色念 珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶,具有很高的比活性,是DNA提取的关键试剂。该酶在较广的pH范围(4?12.5)内及高温 (50?70°C)均有活性,用于质粒或基因组DNA、RNA的分离。在DNA提取中,主要作用是酶解与核酸结合的组蛋白,使DNA游离在溶液中,随后用不同方法进行抽提,除去杂质,收集DNA。EDTA等螯合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。蛋白酶K贮存液一般为10mg/ml或20mg/ml。贮存于一20°C。蛋白酶K溶液为无色透明,如出现沉淀就不能再使用。
sds蛋白酶法的原理?
原理:SDS:使细胞裂解,使与DNA双链紧密相连的组蛋白分开和变性。
EDTA:可以与镁离子螯合,从而有助于阻止核酸分子间的聚集,及核酸与蛋白质分子的聚集,与SDS一样,还可抑制核酸酶的活性。
蛋白酶K:水解蛋白质,在SDS存在下活性增强,不受EDTA的抑制,在较高温度下仍有活性。
苯酚/氯仿:去除变性的蛋白质及多糖、脂类等杂质。