获取目的基因的方法?
1.从基因文库中获取目的基因:将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。 当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。
2.化学合成法。已知目的基因的核苷酸序列,可用DNA合成仪直接合成。
3.用PCR技术扩增技术提取。已知目的基因引物的序列,将整个DNA放入合成仪,因为只有当引物与模板结合后DNA热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中间的目的基因被大量扩增,即被提取出来。
基因表达载体构建步骤?
基因表达载体构建的步骤如下:
1. 目的基因获取:在进行PCR之前,需要先针对自己的基因设计对应的引物;提取与所需表达的基因同源的细胞或组织中的RNA,并经过RT程序将其转化为cDNA;PCR扩增出所需要的基因片段。
2. 载体构建:载体构建(vector construction)是分子生物学研究常用的手段之一。依赖于限制性核酸内切酶、DNA连接酶和其它修饰酶的作用,分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起,再导入宿主细胞,实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。
3. 挑取克隆提质粒验证:挑取单菌落接种于含载体对应抗性的LB培养液中,200rpm,37℃恒温摇床培养过夜,用质粒小量提取试剂盒提取质粒,再进行双酶切验证、测序验证。
将目的基因导入植物细胞的方法
将目的基因导入植物细胞的方法包括:农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法。其中,农杆菌转化法是用的最多的方法,主要是针对双子叶植物和裸子植物。
基因工程的原料就是目的基因。所谓目的基因,就是指已被或欲被分离、改造、扩增和表达的特定基因或DNA片段,一般能编码某一产物或控制某一性状。
获取目的基因的常用方法是哪种
1、从基因文库中获取目的基因:将含有某种生物的许多基因片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。 当需要某一片段时,根据目的基因的有关信息,如根据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物,以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因;
2、化学合成法:已知目的基因的核苷酸序列,可用合成仪直接合成;
3、聚酶链式反应:已知目的基因引物的序列,将整个基因放入合成仪,因为只有当引物与模板结合后基因热聚合酶才能行使聚合功能,所以只有引物中间的目的基因被大量扩增,即被提取出来。
如何促进目的基因的表达
1、外源基因的拷贝数 ;
2、外源基因的表达效率:启动子的强弱,核糖体接合位点的有效性,SD序列和起始密码ATG的间距,密码子组成;
3、表达产物的稳定性;
4、细胞代谢负荷;
5、工程菌的培养条件。
为什么提取目的基因从cDNA文库会比从基因组文库提取准确
因为如果用的探针识别的序列是编码区的并且不跨内含子,这样的探针既可用于基因组文库,也可用于cDNA文库。如果探针识别的序列跨了一个活多个内含子,这样的探针只能用于cDNA文库。如果某个探针既能用于基因组文库,也能用于cDNA文库,那么设计之初,设计者就已经有意避开内含子了。
构建基因表达载体的目的是什么
基因表达载体的构建,即目的基因与运载体结合,是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心;
其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。
目的基因的表达
1、目的基因表达的基本定义:目的基因的表达,是基因工程中常说的一个词,原意是导入目的基因后,该基因能在细胞内合成相应的蛋白质;
2、目的基因是否表达的检测方法:检测时检测到目标蛋白质,说明目的基因表达成功,判断目的基因是否表达,除了检测蛋白质外,还可以检测利用DNA分子杂交技术与mRNA杂交,如果杂交成功,说明目的基因表达成功,也可根据在细胞或生物体中所观察到的生物化学或表型的变化来决定目的基因是否表达。
如何确定目的基因的启动子
启动子定义:启动子是参与特定基因转录及其调控的DNA序列。包含核心启动子区域和调控区域。核心启动子区域产生基础水平的转录,调控区域能够对不同的环境条件作出应答,对基因的表达水平做出相应的调节。
区域:启动子的范围非常大,可以包含转录起始位点上游2000bp,有些特定基因的转录区内部也存在着转录因子的结合位点,因此也属于启动子范围。
目的基因的检测与鉴定
目的基因的检测是检测标记基因,而其鉴定是观测目的基因所表达出来的性状。
所谓检测,就是看目的基因是否已经成功导入受体细胞,要看的是标记基因。导入细胞后,基因并不一定会遗传给后代并表达出来,所以要再鉴定目的基因的性状。一定是先检测,后鉴定。因为受体细胞表达的不一定是整合到细胞核内的,即不一定是能传给下一代,所以要先检测筛选掉没有标记基因的,再检测选出能够表达的。
利用基因工程,将目的基因导入受体细胞并成功表达的过程中,与“基因”的生理活动无关的是酶是(
- 利用基因工程,将目的基因导入受体细胞并成功表达的过程中,与“基因”的生理活动无关的是酶是(辅敞滇缎鄄等殿劝东滑 )
- 解旋酶
何谓目的基因?写出其主要来源或途径。
- 应用重组DNA技术肠护斑咎职侥办鞋暴猫有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA 序列,或是为获得感兴趣基因的表达产物——蛋白质